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RÉSUMÉ
Le pipetage est la mesure et le transfert de petits volumes de liquide (en millilitre et microlitre). Cette opération est de plus en plus répandue, et pour un grand nombre de méthodes, dans les laboratoires scientifiques, médicaux, biotechnologiques. La pipette doit mesurer avec précision une quantité spécifiée de liquide (souvent des réactifs). Cet article présente tout d’abord le principe de fonctionnement et les différents types de pipettes. Il s’attarde ensuite à exposer les facteurs de risques du pipetage, puis les erreurs d’exactitude et de répétabilité que peut engendrer l’opérateur.
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INTRODUCTION
Ces dernières années, le marché de la manipulation de liquide a augmenté rapidement, en raison du développement rapide de la biotechnologie et de la biologie moléculaire. Dans ces domaines, les processus pour dispenser de toutes petites quantités de liquide dans la gamme du microlitre et du millilitre jouent un rôle très important. C’est un élément constant et indispensable pour un grand nombre de méthodes expérimentales.
Les méthodes d’analyse courantes en biologie et dans l’industrie chimique requièrent des processus de manutention de liquide très précis. En même temps, de nouvelles techniques, telles que le génie génétique, créent une demande croissante sur le design, la construction et les matières de ces systèmes.
Une des activités les plus communes des opérateurs de laboratoire est d’échantillonner ou d’ajouter du réactif au cours de tests. Une pipette permet de mesurer correctement une quantité spécifiée de liquide. Les risques associés au maniement des liquides sont bien connus, mais il y a encore d’autres risques physiques pour les opérateurs en laboratoire. Ils exécutent des milliers de tests au quotidien avec des problèmes liés à la dépression continuelle du plongeur en pipetant, provoquant à leur tour des erreurs de pipetage. Beaucoup de facteurs liés au pipetage, pointes et opérateur de laboratoire affectent l’exactitude et la répétabilité du pipetage.
Le prélèvement (pipetage), c’est-à-dire la mesure et le transfert de volumes de liquide dans le domaine du millilitre et du microlitre, est devenu l’opération la plus fréquente dans les laboratoires scientifiques et médicaux. L’exécution rapide et exacte de cette opération est une condition indispensable à la réussite du travail. Ces opérations sont effectuées en majorité à l’aide de pipettes modernes à colonne d’air. En raison des nombreux avantages qu’offrent ces appareils, ils sont idéaux pour le dosage efficace de petites quantités de liquide. L’utilisation de pipettes à colonne d’air, de qualité supérieure, permet de travailler de façon très productive et donc de gagner du temps.
L’objectif des articles [P 1 330] et est de présenter les aspects pratiques et théoriques du pipetage avec les pipettes à colonne d’air.
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Différents types de pipettes
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2. Principe de fonctionnement
2.1 Mode opératoire
Les pipettes à piston sont utilisées pour prélever et distribuer les liquides. Les pipettes à piston monocanal disposent d’un seul montage corps/piston. Les pipettes à piston multicanal disposent d’un montage piston/bouteille pour chaque canal ; un volume de liquide identique peut être distribué vers plusieurs récipients simultanément (par exemple, les puits d’une microplaque). Les pipettes peuvent avoir un réglage prédéfini en usine pour distribuer un volume fixe ou présenter un volume variable à l’intérieur d’une plage de volume.
Un cône en plastique ou en verre est monté sur la pipette à piston (figure 1). En maintenant le piston en position haute à la limite inférieure d’aspiration, le cône est plongé dans le liquide dont un volume doit être mesuré puis distribué. Lorsque le piston remonte à la limite supérieure d’aspiration, le liquide est aspiré. Le volume liquide à distribuer est ensuite expulsé en abaissant ou en faisant glisser le piston entre les limites qui définissent le volume. Certaines pipettes à piston à déplacement d’air ont une course de purge qui peut être utilisée afin d’expulser la dernière goutte de liquide.
Le piston peut soit :
-
avoir un corps d’air contenu entre le piston et la surface du liquide ( déplacement d’air – type A) ;
-
ou être en contact direct avec la surface du liquide ( déplacement positif ou direct – type D). Pour l’ajustage, le piston plongeur ou le capillaire, ou ces deux éléments, peuvent être réutilisés ( type D1) ou jetés (type D2).
Le bouton de pipetage (figure 1) déplace le piston dans un cylindre ; l’air de la « chambre à air » est chassé à travers un canal vers la pointe jetable. Sur les pipettes à volume variable, la course du piston est réglable.
En plongeant la pointe de pipette dans un liquide, ce dernier est aspiré dans la pointe dès que le piston retourne dans sa position de départ sous l’action d’un ressort.
Le volume de liquide aspiré correspond en principe au volume d’air précédemment chassé hors du cylindre par le piston.
...
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