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EnglishRÉSUMÉ
Comprendre le fonctionnement des enzymes nécessite la connaissance de la structure stéréoélectronique de ces macromolécules biologiques formées de l’assemblage d’acides aminés. Les différentes techniques biochimiques et physico-chimiques mises en œuvre pour déterminer leur structure sont abordées. L’article comporte l’étude de trois enzymes aux caractéristiques structurales différentes : l’anhydrase carbonique, la glycogène phosphorylase et la protéase du virus de l’immunodéficience humaine (VIH).
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Serge KIRKIACHARIAN : Docteur ès-Sciences Physiques – Pharmacien - Professeur émérite de chimie thérapeutique de la faculté des sciences pharmaceutiques et biologiques de l’Université Paris Sud - Praticien hospitalier chef de service honoraire des hôpitaux de Paris, France
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Julien DUMOND : Docteur en virologie enzymologie - Consultant en entreprises pharmaceutiques, Metz, France
INTRODUCTION
Les enzymes sont des protéines, le terme protéine vient du préfixe « proto- », qui signifie en premier, en relation avec l’importance de ces macromolécules biologiques dans toute matière vivante, et le fait qu’avant 1950 la plupart des scientifiques accordaient plus de crédit au paradigme des protéines à l’origine de la vie qu’à celui des acides nucléiques à la base du vivant.
Comme toutes les protéines, une enzyme est codée par au moins un gène. Sa structure est constituée par un enchaînement d’acides aminés qui prend une conformation précise dans l’espace, afin de permettre la réalisation d’une réaction chimique spécifique. L’enzyme est donc un polymère fonctionnel de plus de 50 à 100 acides aminés suivant la définition donnée à une protéine. Grâce à des ribosomes, elle est synthétisée au cours d’un processus de traduction initié dans le cytoplasme d’une cellule ou au niveau de la matrice mitochondriale à partir d’un ARNm (acide ribonucléique messager) contenant l’information génétique.
Les recherches fondamentales et appliquées aux enzymes sont très conséquentes dans des domaines variés. De nombreuses entreprises et laboratoires investissent beaucoup de moyens humains et financiers afin de caractériser ces catalyseurs et de les exploiter au mieux pour l’espèce humaine. Avant d’utiliser ou de cibler une enzyme, les protocoles de purification doivent être clairement établis, et la connaissance de sa structure et de ses propriétés physicochimiques totalement maîtrisées.
Les enzymes ont été étudiées tout d’abord pour leur implication dans le métabolisme du vivant. Il s’agissait dans ce premier temps de molécules facilement accessibles (issues de liquides ou d’organismes simples). Quand les processus de purification ont été améliorés, de nombreuses enzymes furent isolées, puis caractérisées. Leurs possibles applications par et pour l’être humain pouvaient alors être envisagées. À l’heure actuelle, on relève trois domaines majeurs d’applications industrielles ou de ciblage des enzymes, ils nécessitent la maîtrise de nombreux domaines connexes :
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entreprises pharmaceutiques et cosmétiques pour lesquelles la conception de médicaments et produits de bien-être impose des connaissances en chimie organique, en modélisation moléculaire, en pharmacologie, en ADMEtox (administration, distribution, métabolisme, excrétion et toxicologie), en galénique... Notons que des entreprises de service pharmaceutique se sont développées ces trente dernières années pour proposer le panel le plus complet possible de tests enzymatiques (cinétiques) ou sur récepteurs (affinité et tests fonctionnels), afin d’accompagner les laboratoires pharmaceutiques dans leurs programmes de recherche ;
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entreprises agro-alimentaires où la fabrication de produits destinés à la consommation implique la maîtrise de la microbiologie, de la biologie végétale, du métabolisme et du fonctionnement de bio-réacteurs... ;
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entreprises liées à l’environnement dans l’optique de générer des produits écologiques dans les domaines des biocarburants, du papier et des détergents biologiques nécessitant des connaissances en biologie végétale, en microbiologie, en écologie et en métabolisme.
Cet article est consacré à la description des techniques mises en œuvre pour la détermination de la structure des enzymes.
Le lecteur trouvera en fin d’article un glossaire et un tableau des notations et des sigles utilisés.
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5. Glossaire
enzyme ; enzyme
Catalyseur biologique de nature protéique, qui accélère une réaction chimique en ne modifiant pas l’équilibre final. En fin de réaction, la molécule est disponible pour une nouvelle prise en charge de substrat (réactif).
structure primaire ; primary structure
Structure définie par la séquence en acides aminés. Elle correspond à l’hétéropolymère protéique linéaire présentant deux extrémités différentes (N-ter et C-ter).
structure secondaire ; secondary structure
Structure correspondant à des motifs structuraux qui résultent du reploiement extrêmement rapide de la chaîne protéique dans l’espace indépendamment de la séquence d’acides aminés.
structure tertiaire ; tertiary structure
Repliement spécifique de la chaîne polypeptidique déterminée par la séquence des acides aminés, donnant naissance à des régions appelées domaines. La grande majorité des protéines se replient dans l’espace pour former des structures globulaires. La structure tertiaire correspond à la conformation spatiale complète et définitive prise par l’hétéropolymère.
structure quaternaire ; quaternary structure
Structure d’une protéine constituée par le regroupement de plusieurs sous-unités. Les sous-unités peuvent être semblables ou différentes, elles sont appelées monomères ou protomères.
CLHP Chromatographie liquide haute performance ; HPLC High Performance Liquid Chromatography
Technique permettant de séparer les constituants d’un mélange. Une pompe injecte sous pression le ou les liquides (phase mobile) au niveau d’une colonne de chromatographie (phase stationnaire établie), qui retient les différentes molécules à séparer du mélange en fonction de leurs caractéristiques physicochimiques et des propriétés de la colonne utilisée. Pour éluer les composantes du mélange, le système peut être utilisé en mode isocratique (toujours la même phase mobile) ou en mode gradient (variation de la phase mobile en constituants et proportions sur la durée de l’expérience).
CLUP Chromatographie liquide ultra performance ; UPLC Ultra Performance Liquid Chromatography
Principe identique à celui de l’HPLC, mais à plus fortes...
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Glossaire
BIBLIOGRAPHIE
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(1) - ELIEL (E.L.), WILEN (S.H.) - Stéréochimie des composés organiques. - Tec et Doc Lavoisier, Paris (1996).
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(2) - Le BRIAND (N.), CASALEGNO (J.S.), ESCURET (V.), GAYMARD (A.), LINA (B.), OTTMANN (M.), FROBERT (E.) - La balance HA-NA des virus influenza A(H1N1). - Virologie (2016).
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(3) - AL ALI (A.) - Le dosage des cytochromes P450 (CYPs) humains par spectrométrie de masse : applications en toxicologie. - Thèse soutenue en 2014 sous la direction de BEAUNE (P.), discipline : Médicaments et toxicologie, Université Paris V René Descartes, INSERM UMRS 1147 (2014).
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(4) - Document DARBON (H.) - http://biologie.univ-mrs.fr/masterBBSG/images/pdf/structures%20secondaires.pdf (autorisation d’utilisation)
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(5) - Document LEBLANC (B.) - http://biochimiedesproteines.espaceweb.usherbrooke.ca/2b.html (autorisation d’utilisation)
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