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Article de référence | Réf : P1455 v2

Optimisation
Chromatographie en phase liquide - Théorie et méthodes de séparation

Auteur(s) : Marcel CAUDE, Alain JARDY

Relu et validé le 05 févr. 2019

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Auteur(s)

  • Marcel CAUDE : Ingénieur du Conservatoire National des Arts et Métiers (CNAM ) - Docteur ès Sciences - Directeur de Recherche au Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS )

  • Alain JARDY : Ingénieur CNAM - Docteur ès Sciences - Maître de Conférences à l'École Supérieure de Physique et Chimie de Paris

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INTRODUCTION

La chromatographie en phase liquide (CPL) est une méthode de séparation mettant en œuvre différents modes représentés sur la figure 1 (les chromatographies d'exclusion stérique et chirale faisant l'objet d'articles séparés de ce traité).

La chromatographie en phase liquide sur colonnes est devenue un outil analytique performant utilisé dans des domaines variés allant de l'analyse de fluides biologiques à celui des produits pétroliers lourds. Ce développement est dû à la fois à une meilleure compréhension des mécanismes d'interaction - au demeurant de plus en plus diversifiés -, aux grandes efficacités obtenues avec des phases stationnaires de plus en plus fines (3 µm) et enfin aux progrès importants effectués dans le domaine de l'appareillage, en particulier pour la détection.

La CPL se présente ainsi comme une méthode de séparation complémentaire de la chromatographie en phase gazeuse (CPG) pour l'analyse de solutés peu volatils ou thermodégradables (cas de la majorité des molécules thérapeutiques). Elle se distingue de la CPG par la variété des phases stationnaires et partant des interactions mises en jeu et par une température moins élevée, ce qui accroît la force de ces interactions et augmente la sélectivité.

En revanche, la CPL est une méthode de mise en œuvre plus délicate que la CPG ; de plus, malgré les progrès récents, elle souffre encore de l'absence de détecteurs aussi sensibles et universels que la détection à ionisation de flamme de la CPG.

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VERSIONS

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DOI (Digital Object Identifier)

https://doi.org/10.51257/a-v2-p1455


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8. Optimisation

Dans la mise au point d’une séparation, il faut, certes, obtenir une résolution satisfaisante, mais aussi prendre en compte certaines contraintes pratiques telles la durée de la séparation, la perte de charge (généralement limitée vers 200 à 300 bar), la détectabilité (qui doit être aussi bonne que possible dans l’analyse de traces). Dès lors, une stratégie d’optimisation consiste à déterminer un point de fonctionnement expérimental constituant un compromis vis-à-vis de contraintes contradictoires (figure 48).

Ainsi, une augmentation de la longueur de la colonne pour accroître l’efficacité et partant la résolution de la séparation entraîne, toutes choses égales par ailleurs, une augmentation de la perte de charge, de la durée de l’analyse, de la dilution des solutés dans l’effluent. Néanmoins l’objectif prioritaire étant la qualité de la séparation, nous examinerons dans un premier temps l’optimisation de la résolution avant de traiter l’optimisation multiparamètre.

8.1 Optimisation de la résolution

Reprenons l’équation établie précédemment 1.4 d’évaluation de la résolution :

( 4 )

I II III

l’indice 2 se rapportant au soluté le plus retenu.

Pour accroître RS, on peut augmenter l’un quelconque des trois facteurs I (sélectivité), II (rétention des solutés), III (efficacité de la colonne).

Cependant l’ordre n’est pas indifférent, on optimisera d’abord la sélectivité, paramètre thermodynamique déterminant, puis la rétention des solutés et enfin l’efficacité...

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BIBLIOGRAPHIE

  • (1) - ROSSET (R.), CAUDE (M.), JARDY (A.) -   Chromatographies en phases liquide et supercritique.  -  Masson, Paris, 1991.

  • (2) - BIDLINGMEYER (B.A.), WARREN Jr (F.V.) -   *  -  Anal. Chem., 56, p. 1583 A, 1984.

  • (3) - FOLEY (J.P.), DORSEY (J.G.) -   *  -  Anal. Chem., 55, p. 730, 1983 et J. Chromatogr. Sci., 22, p. 40, 1984.

  • (4) - WILKE (C.R.), CHANG (P.) -   *  -  Am. Inst. Chem. Eng. J., 1, p. 264, 1955.

  • (5) - KATZ (E.D.), SCOTT (R.P.W.) -   *  -  J. Chromatogr. 270, p. 29, 1983.

  • (6) - SASSIAT (P.R.), MOURIER (P.), CAUDE (M.H.), ROSSET (R.H.) -   *  -  Anal. Chem., 59, p. 1164, 1987.

  • (7)...

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