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3 - CLASSIFICATION ET SÉLECTION DES SOLVANTS

4 - SÉPARATION DE SOLUTÉS MOLÉCULAIRES

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7 - CHOIX D'UNE MÉTHODE DE SÉPARATION

8 - OPTIMISATION

9 - ANALYSE QUANTITATIVE

Article de référence | Réf : P1455 v2

Choix d'une méthode de séparation
Chromatographie en phase liquide - Théorie et méthodes de séparation

Auteur(s) : Marcel CAUDE, Alain JARDY

Relu et validé le 05 févr. 2019

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Auteur(s)

  • Marcel CAUDE : Ingénieur du Conservatoire National des Arts et Métiers (CNAM ) - Docteur ès Sciences - Directeur de Recherche au Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS )

  • Alain JARDY : Ingénieur CNAM - Docteur ès Sciences - Maître de Conférences à l'École Supérieure de Physique et Chimie de Paris

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INTRODUCTION

La chromatographie en phase liquide (CPL) est une méthode de séparation mettant en œuvre différents modes représentés sur la figure 1 (les chromatographies d'exclusion stérique et chirale faisant l'objet d'articles séparés de ce traité).

La chromatographie en phase liquide sur colonnes est devenue un outil analytique performant utilisé dans des domaines variés allant de l'analyse de fluides biologiques à celui des produits pétroliers lourds. Ce développement est dû à la fois à une meilleure compréhension des mécanismes d'interaction - au demeurant de plus en plus diversifiés -, aux grandes efficacités obtenues avec des phases stationnaires de plus en plus fines (3 µm) et enfin aux progrès importants effectués dans le domaine de l'appareillage, en particulier pour la détection.

La CPL se présente ainsi comme une méthode de séparation complémentaire de la chromatographie en phase gazeuse (CPG) pour l'analyse de solutés peu volatils ou thermodégradables (cas de la majorité des molécules thérapeutiques). Elle se distingue de la CPG par la variété des phases stationnaires et partant des interactions mises en jeu et par une température moins élevée, ce qui accroît la force de ces interactions et augmente la sélectivité.

En revanche, la CPL est une méthode de mise en œuvre plus délicate que la CPG ; de plus, malgré les progrès récents, elle souffre encore de l'absence de détecteurs aussi sensibles et universels que la détection à ionisation de flamme de la CPG.

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VERSIONS

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DOI (Digital Object Identifier)

https://doi.org/10.51257/a-v2-p1455


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7. Choix d'une méthode de séparation

7.1 Guide de sélection

Le choix d’une méthode de séparation constitue une étape essentielle dans la mise au point de toute analyse par CPL. Le fait, pour le chromatographiste, de disposer aujourd’hui d’un vaste éventail de méthodes et, à l’intérieur de celles-ci, d’une large gamme de phases stationnaires, ne simplifie pas ce choix, alors même qu’il présente, par ailleurs, l’avantage de permettre certaines séparations avec une sélectivité, et partant, une résolution rarement atteinte auparavant.

Le choix d’une méthode est largement tributaire de la nature de l’échantillon et de son degré de connaissance, mais conserve aussi une part certaine d’empirisme. Il n’est pas rare qu’une même séparation puisse être obtenue selon plusieurs voies. Le choix de telle ou telle méthode est fonction de nombreux facteurs comme la présence d’autres solutés, l’éventualité d’une étape préalable d’extraction, voire de préconcentration, le mode de détection, les données bibliographiques concernant des problèmes analogues, mais aussi les phases disponibles ou l’expérience du chromatographiste. Tout au contraire, un problème de séparation d’énantiomères oriente prioritairement l’opérateur vers la mise en œuvre de phases chirales et le problème du choix de la phase stationnaire et de l’optimisation de la composition de la phase mobile assurant la meilleure sélectivité.

S’il n’existe pas de méthodologie infaillible, en particulier dans le cas de l’analyse d’un échantillon inconnu, différentes considérations peuvent utilement guider les essais expérimentaux (figure 47).

Nous les présenterons dans l’ordre du degré de connaissance croissant de l’échantillon.

HAUT DE PAGE

7.1.1 Masse molaire (ou domaine de masses molaires)

Dans le cas de solutés de faibles masses molaires, inférieures à 200-300 g, la CPL ne s’impose souvent que si la chromatographie en phase gazeuse est soit en défaut, parce qu’il s’agit d’espèces...

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BIBLIOGRAPHIE

  • (1) - ROSSET (R.), CAUDE (M.), JARDY (A.) -   Chromatographies en phases liquide et supercritique.  -  Masson, Paris, 1991.

  • (2) - BIDLINGMEYER (B.A.), WARREN Jr (F.V.) -   *  -  Anal. Chem., 56, p. 1583 A, 1984.

  • (3) - FOLEY (J.P.), DORSEY (J.G.) -   *  -  Anal. Chem., 55, p. 730, 1983 et J. Chromatogr. Sci., 22, p. 40, 1984.

  • (4) - WILKE (C.R.), CHANG (P.) -   *  -  Am. Inst. Chem. Eng. J., 1, p. 264, 1955.

  • (5) - KATZ (E.D.), SCOTT (R.P.W.) -   *  -  J. Chromatogr. 270, p. 29, 1983.

  • (6) - SASSIAT (P.R.), MOURIER (P.), CAUDE (M.H.), ROSSET (R.H.) -   *  -  Anal. Chem., 59, p. 1164, 1987.

  • (7)...

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