Présentation
Auteur(s)
-
Marcel CAUDE : Ingénieur du Conservatoire National des Arts et Métiers (CNAM ) - Docteur ès Sciences - Directeur de Recherche au Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS )
-
Alain JARDY : Ingénieur CNAM - Docteur ès Sciences - Maître de Conférences à l'École Supérieure de Physique et Chimie de Paris
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Lire l’articleINTRODUCTION
La chromatographie en phase liquide (CPL) est une méthode de séparation mettant en œuvre différents modes représentés sur la figure 1 (les chromatographies d'exclusion stérique et chirale faisant l'objet d'articles séparés de ce traité).
La chromatographie en phase liquide sur colonnes est devenue un outil analytique performant utilisé dans des domaines variés allant de l'analyse de fluides biologiques à celui des produits pétroliers lourds. Ce développement est dû à la fois à une meilleure compréhension des mécanismes d'interaction - au demeurant de plus en plus diversifiés -, aux grandes efficacités obtenues avec des phases stationnaires de plus en plus fines (3 µm) et enfin aux progrès importants effectués dans le domaine de l'appareillage, en particulier pour la détection.
La CPL se présente ainsi comme une méthode de séparation complémentaire de la chromatographie en phase gazeuse (CPG) pour l'analyse de solutés peu volatils ou thermodégradables (cas de la majorité des molécules thérapeutiques). Elle se distingue de la CPG par la variété des phases stationnaires et partant des interactions mises en jeu et par une température moins élevée, ce qui accroît la force de ces interactions et augmente la sélectivité.
En revanche, la CPL est une méthode de mise en œuvre plus délicate que la CPG ; de plus, malgré les progrès récents, elle souffre encore de l'absence de détecteurs aussi sensibles et universels que la détection à ionisation de flamme de la CPG.
VERSIONS
- Version archivée 1 de oct. 1979 par Robert ROSSET, Marcel CAUDE, Alain FOUCAULT, Alain JARDY
DOI (Digital Object Identifier)
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5. Séparation de solutés ionisés
Les mécanismes de séparation de ces solutés sont fondés essentiellement sur des interactions électrostatiques entre espèces chargées présentes simulatanément dans chacune des deux phases. Rappelons que de nombreux composés organiques sont susceptibles de donner des ions en solution par un controle adéquat du pH.
Ainsi les acides aminés, en fonction du pH, peuvent être présents en solution sous forme moléculaire ou sous la forme d’anions ou de cations.
Considérons, par exemple, le cas de la glycine HOOC–CH2–NH2 dont les pkA sont respectivement 2,3 et 9,8 (le premier correspond à la constante d’acidité du couple –COOH/–COO–, le second à la constante du couple –NH3+/–NH2). La figure 26 montre l’évolution de la charge moyenne et la répartition des espèces de la glycine en fonction du pH de la phase aqueuse.
On observe que la glycine se comporte comme un cation pour des valeurs de pH inférieures à 3, comme un anion pour des valeurs de pH supérieures à 9 et comme une espèce non chargées dans la zone de pH intermédiaire où la forme zwitterionique prédomine. Plus généralement, pour un couple HA+/A, la forme ionique prédomine pour des valeurs de au pH inférieures pkA du couple ; on a en effet :
(Si pH = pkA – 1, alors │HA+│ = 10 │A│,
si pH = pkA – 2, │HA+│ = 100 │A│, etc.).
Cet exemple montre que la séparation des acides aminés peut être envisagée soit sous forme non chargée entre pH 4 et 8 (on parle alors de « recul d’ionisation » et on met en œuvre, par exemple, la chromatographie de partage à polarité de phases inversée), soit sous la forme d’espèces ionisées :
-
anioniques (pH > 9),
-
cationiques (pH < 3).
5.1 Chromatographie d'échange d'ions
Les séparations par échange d’ions s’adressent plus particulièrement...
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Séparation de solutés ionisés
BIBLIOGRAPHIE
-
(1) - ROSSET (R.), CAUDE (M.), JARDY (A.) - Chromatographies en phases liquide et supercritique. - Masson, Paris, 1991.
-
(2) - BIDLINGMEYER (B.A.), WARREN Jr (F.V.) - * - Anal. Chem., 56, p. 1583 A, 1984.
-
(3) - FOLEY (J.P.), DORSEY (J.G.) - * - Anal. Chem., 55, p. 730, 1983 et J. Chromatogr. Sci., 22, p. 40, 1984.
-
(4) - WILKE (C.R.), CHANG (P.) - * - Am. Inst. Chem. Eng. J., 1, p. 264, 1955.
-
(5) - KATZ (E.D.), SCOTT (R.P.W.) - * - J. Chromatogr. 270, p. 29, 1983.
-
(6) - SASSIAT (P.R.), MOURIER (P.), CAUDE (M.H.), ROSSET (R.H.) - * - Anal. Chem., 59, p. 1164, 1987.
-
(7)...
1 Fournisseurs de matériels et de produits
(liste non exhaustive)
Alltech http://www.alltechweb.com
J.T. Baker http://www.jtbaker.com
Beckman Coulter http://www.beckman.com
Chromoptic http://www.chromoptic.com
Cluzeau Info Labo
Dionex http://www.dionex.com
Gilson http://www.gilson.com
Interchim http://www.interchim.com
Millipore http://www.millipore.com
Thermo Electron Corporation http://www.thermo.com
Perkin Elmer http://www.perkinelmer.fr
Pfizer http://www.pfizer.com
Sedere http://www.sedere.com
SGE Analytical Science http://www.sge.com
Sopares
Sigma Aldrich http://www.sigmaaldrich.com
Varian http://www.varianinc.com
Waters http://www.waters.com
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