Bibliographie & annexes
Présentation
En anglais
RÉSUMÉ
La chromatographie planaire se distingue nettement de la chromatographie classique, et plusieurs types de détection sont possibles : en discontinu, en continu. Les méthodes d'analyse qui en découlent sont soit qualitatives (détection visuelle) soit quantitatives (densitométrie). Dans cette dernière configuration, la plaque chromatographique peut être alors considérée comme une colonne plate à usage unique. Après grattage de la zone où la substance a été localisée, la phase stationnaire est séparée du soluté et soumis à une technique de spectrométrie (infrarouge, de masse...).
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Planar chromatography is very different from traditional chromatography and several types of detection are possible: discontinuous and continuous. The analysis methods are either quantitative (visual detection) or quantitative (densitometry). In the second case, the chromatographic plate can be considered as a flat column for a single use. After scraping the area where the substance has been localized, the stationary phase is separated from the solute and subjected to a spectrometric technique (infrared, mass, etc.).
Auteur(s)
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Antoine Michel SIOUFFI : Docteur ès sciences - Professeur émérite à l’Université Paul Cézanne, Aix Marseille III
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Chantal DAUPHIN : Docteur ès sciences pharmaceutiques - Maître de conférences à l’université Paris XI
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Dominique PRADEAU : Docteur ès sciences pharmaceutiques - Pharmacien responsable de l’Établissement pharmaceutique des Hôpitaux de Paris
INTRODUCTION
En chromatographie planaire classique, la détection des substances est une opération distincte de la chromatographie et elle s’effectue sur une couche débarrassée du solvant de développement : c’est une détection en discontinu. En chromatographie planaire à flux forcé, on peut procéder de la même façon, mais il est également possible de réaliser une détection en continu au moyen d’un détecteur semblable à ceux utilisés en CLHP. En détection en discontinu, la méthode générale consiste à comparer les régions de la couche où il n’y a pas d’échantillon aux régions dans lesquelles l’échantillon est présent. Lorsque suffisamment de substance peut être récupérée pour procéder à une identification par une méthode spectrale, la plaque est grattée à l’endroit où la substance a été localisée, la phase stationnaire est séparée du soluté et il ne reste plus qu’à réaliser la spectrométrie (infrarouge, de masse, etc.). Nous allons comparer qualitativement et quantitativement les différentes méthodes d’analyse.
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Conclusion
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4. Courbes de calibrage
Elles sont tracées très simplement en portant sur un graphe la réponse du détecteur en fonction de la quantité ou de la concentration injectée. En ultraviolet, visible ou fluorescence, du fait de la loi de Beer, toutes les courbes présentent une partie droite aux faibles concentrations. Puis elles s’incurvent plus ou moins fortement avant d’arriver à un plateau, ce dernier indique la saturation du détecteur. Cela est valable aussi bien en CCM qu’en CP à flux forcé avec élution. En toute rigueur, il faut enregistrer l’aire sous le pic, mais la hauteur de pic peut être amplement suffisante dans le cas de substances bien résolues [19].
La linéarisation de la courbe de calibrage doit être effectuée par régression. Chaque soluté possède sa propre courbe de calibrage.
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Une relation de type y = Ax + B (avec y réponse du détecteur et x concentration du soluté) est très souvent utilisée mais elle n’est valable que pour de très faibles concentrations, ce qui suppose que l’on minimise toute erreur sur le volume injecté.
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La relation lg y = A lg x + B est applicable sur une grande gamme de concentrations. À l’expérience, c’est la droite de régression la plus fiable.
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L’emploi des inverses 1/y = A/x + B est conseillé lorsque la courbe y = f (x) est très fortement incurvée.
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Enfin, dans quelques cas particuliers,
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peut se révéler utile. Il faut se souvenir que chaque détecteur possède une gamme dans laquelle les conditions opératoires sont maximales.
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Courbes de calibrage
BIBLIOGRAPHIE
-
(1) - STAHL (E.) - Dünnschicht-Chromatographie. Ein Laboratoriumshandbuch - . Springer-Verlag, Berlin (1962).
-
(2) - RANDERATH (K.) - Chromatographie sur couches minces - . Gauthier-Villars, Paris (1971).
-
(3) - GUIOCHON (G.), GONNORD (M.F.), ZAKARIA (M.), BEAVER (L.), SIOUFFI (A.M.) - Chromatography with a two dimensional column - . Chromatographia, 17, 121-126 (1983).
-
(4) - RIGHEZZA (M.), SIOUFFI (A.M.) - Planar chromatography with rectangular packed capillary columns and electrochemical detection - . J. Planar Chromatogr., 1, 293-298 (1988).
-
(5) - RUOFF (A.L.), GIDDINGS (J.C.), STEWART (G.H.), SHIN (H.K.) - Diffusion of liquids in unsatured paper - . J. Planar Chromatogr., 3, 438-445 (1960).
-
(6) - GUIOCHON (G.), SIOUFFI (A.M.) - Study of the performances of thin layer chromatography. III. Flow velocity of the mobile phase - ....
(liste non exhaustive)
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Merck http://www.merck.com
Macherey Nagel http://www.macherey-nagel.com
Whatman http://www.whatman.com
Analtech http://www.analtech.com
HAUT DE PAGE1.2 Appareillages de chromatographie planaire
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Radiomatic http://las.perkinelmer.com
Shimadzu http://www.shimadzu.fr
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