Bibliographie & annexes
Présentation
Auteur(s)
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Pierre GAREIL : Professeur à l’École Nationale Supérieure de Chimie de Paris
-
Gabriel PELTRE : Président fondateur de la Société Française d’ÉlectrophorèseInstitut Pasteur
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Lire l’articleINTRODUCTION
L‘électrophorèse est une technique importante dans la purification de très nombreuses molécules chargées électriquement. Elle est devenue un outil principalement analytique, indispensable à la détermination de propriétés de molécules aussi essentielles que leur point isoélectrique, leur mobilité électrophorétique, leur taille. Elle permet aussi d’aborder leur solubilité, leur affinité pour des ligands (lectines, anticorps... ). Pour remplir cette tâche, l’électrophorèse est devenue « protéiforme », c’est-à-dire extrêmement variée et spécialisée ; une évolution de son champ d’application est apparue : les petits ions, les peptides, les protéines, puis les acides nucléiques.
À partir de 1976, les acides nucléiques et les nucléotides ont été analysés avec une extraordinaire finesse par électrophorèse permettant de connaître la séquence des ADN (acide désoxyribonucléique ), nucléotide par nucléotide. C’est ainsi qu’il est devenu plus facile de déduire la séquence des acides aminés de certaines protéines que d’analyser l’enchaînement de ces acides aminés, présents dans la protéine hautement purifiée, par dégradations chimique et enzymatique.
L’électrophorèse capillaire introduite en 1965 ne verra son véritable développement qu’au cours des années 80 par la commercialisation d’appareils performants permettant des séparations rapides et à haute sensibilité de détection dans des capillaires de moins de 100 µm de diamètre intérieur.
Enfin l’électrophorèse peut aussi exceller dans le domaine préparatif, là où la chromatographie, l’ultrafiltration, la centrifugation sont bien présentes soit par des techniques en continu (veine liquide ), soit par recyclage pour obtenir de très hautes puretés (électrolyseur à multicompartiments ).
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VERSIONS
- Version archivée 1 de janv. 1980 par Jean MAHENC, Victor SANCHEZ
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Mise en œuvre et applications1. Aspects théoriques
1.1 Principes des méthodes fondamentales
Fondamentalement, toute séparation électrophorétique résulte de la possibilité de faire migrer les espèces à séparer à des vitesses différentes sous l’action d’un champ électrique dans un électrolyte de composition variée.
HAUT DE PAGE1.1.1 Électrophorèse de zone (EZ)
C’est la méthode la plus simple. L’échantillon à séparer est placé dans un tampon unique assurant un pH constant et prend donc une charge par rapport à ce tampon (figure 1a). S’il est plus acide que celui-ci, il est chargé négativement, attiré par l’anode et repoussé par la cathode. Si son point isoélectrique pI (pH de la solution dans laquelle il se trouve neutre) est supérieur au pH du tampon, il est chargé positivement et migre vers la cathode comme un cation. Si l’échantillon est neutre, donc placé à son pI, il n’est pas soumis au champ électrique mais il a la totale liberté de diffuser dans toutes les directions autour de son point d’application. C’est là la principale faiblesse de l’électrophorèse de zone : aucune force électromotrice ne lutte contre la diffusion des échantillons lors de leur migration. Ainsi donc, pour une meilleure résolution des séparations selon ce principe, il faut veiller à les réaliser rapidement ou à se servir d’un autre critère de séparation tel que le tamisage moléculaire au cours d’une électromigration dans un gel de porosité sélective, d’où le très grand succès pratique de la technique dite de SDS-PAGE (cf. § 2.1.1.2).
HAUT DE PAGE...
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Aspects théoriques
BIBLIOGRAPHIE
-
(1) - DEYL (Z.) - Electrophoresis : a survey of techniques and applications. Part A : techniques. - J. Chromatogr. Lib., vol. 18, Elsevier, Amsterdam, 1979.
-
(2) - GROSSMAN (P.D.), COLBURN (J.C.) - Capillary electrophoresis : theory and practice. - Academic Press, San Diego, 1992.
-
(3) - LI (S.F.Y.) - Capillary electrophoresis : principles, practice and applications. - J. Chromatogr. Lib., vol. 52, Elsevier, Amsterdam, 1992.
-
(4) - HEIGER (D.N.) - High performance capillary electrophoresis : an introduction. - Hewlett-Packard, Walbronn, 1992.
-
(5) - JANDICK (P.), BONN (G.) - Capillary electrophoresis of small molecules and ions. - VCH, Weinheim, 1993.
-
(6) - GAREIL (P.) - L’électrophorèse de zone et la chromatographie électrocinétique capillaires : I. Principes et notions fondamentales. - ...
ANNEXES
BAALBAKI (B.) - Apport de l’électrophorèse capillaire au contrôle de qualité de spécialités pharmaceutiques. - 2003. Université Montpellier 1.
DJOUADI (Z.) - Séquençage de l’ADN par électrophorèse : étude des effets thermiques sur la migration. - 2000. Université d’Orsay.
DUTEIL (S.) - Séparation et caractérisation des fragments d’héparine par électrophorèse capillaire et spectrométrie de masse. - 2000. Université Paris 6.
MARTIN JOUET (M.) - Évaluation des possibilités d’utilisation de l’électrophorèse capillaire pour les études de complexation. - 2000. Université de Strasbourg.
VAYABOURY (W.) - Polymérisation du N-carboxyanhydride de la N[epsilon]-trifluoroacétyl-L-lysine : étude mécanistique et caractérisation par électrophorèse capillaire. - 2003. Université Montpellier 2.
BEAUNOM (J.) - L’électrophorèse capillaire : une technique d’avenir ; application au dosage de l’amikacine (des pharmacies industrielle et biomédicale). - 2000. Université de Reims.
JOUBERT (R.) - Application de l’électrophorèse bidimensionnelle des protéines à l’étude des levures industrielles de brasserie. - 2000. Université Bordeaux 2.
AIT-ADOUBEL (A.) - Nouvelles approches en électrophorèse capillaire pour l’énantioséparation d’acides aminés aromatiques ou aliphatiques non dérivés. - 2004. Université de Rouen.
DESCROIX (S.) - L’électrophorèse capillaire en milieu non aqueux : contribution à la compréhension des phénomènes physico-chimiques impliqués et applications. - 2002. Université Paris 6.
BENNANI...
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