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RÉSUMÉ
La spectrométrie de masse est une technique analytique extrêmement importante pour l'identification de molécules, ceci par la mesure du rapport masse sur charge (m/z) de l'espèce ionisée ou de ses fragments. Le couplage avec un laser apporte une dimension nouvelle à la spectrométrie de masse. En effet, grâce au contrôle de l'excitation de l'ion via l'énergie de la lumière utilisée, la nature et la position des chromophores, la durée temporelle de l'impulsion lumineuse et sa puissance, cette technique d’excitation ouvre la voie vers un contrôle de la fragmentation des ions, une fragmentation sélective d'un isomère donné, la mesure du spectre d'absorption optique d'ions isolés... Ainsi, au-delà de l'analyse structurelle, le couplage spectroscopie optique-spectrométrie de masse permet l'étude conformationnelle et dynamique de biomolécules isolées ou dans un environnement contrôlé.
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Mass spectrometry is an extremely important analytic technique for the identification of molecules, via the measurement of the mass-to-charge ratio (m/z) of the ionized species or of its fragments. The coupling with a laser has brought a new dimension to mass spectrometry. Indeed, due to the control of the ion excitation via the energy of the light used, the nature and position of the chromophores, the temporal duration of the light pulse and its power, this excitation technique opens the way towards the control of ion fragmentation, a selective fragmentation of a given isomer, the measurement of the optical absorption spectrum of isolated ions, etc. Thus, beyond the structural analysis, the coupling of optical spectrometry and mass spectrometry allows for the conformational and dynamic study of biomolecules that are isolated or in a controlled environment.
Auteur(s)
INTRODUCTION
La spectrométrie de masse est une technique analytique extrêmement importante pour l'identification de molécules, ceci par la mesure du rapport masse sur charge (m/z) de l'espèce ionisée ou de ses fragments. La spectroscopie UV-visible permet de sonder les propriétés électroniques et structurelles d'une molécule ou d'un ion. Ces deux approches peuvent être couplées dans des expériences de photodissociation et de photodétachement d'électron sur des biomolécules piégées.
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1. Spectrométrie de masse en tandem et modes d'excitation
Rodolphe ANTOINE est chargé de recherche au CNRS, au laboratoire de spectrométrie ionique et moléculaire (UMR 5579, CNRS et université Lyon-1).
Philippe DUGOURD est directeur de recherche au CNRS dans le même laboratoire.
La spectrométrie de masse est une technique analytique extrêmement importante pour l'indentification de molécules, ceci par la mesure du rapport masse sur charge (m/z) de l'espèce ionisée ou de ses fragments .
Sur la spectrométrie de masse :
Spectrométrie de masse – Principe et appareillage de Guy Bouchoux et Michel Sablier
Techniques de piégeage d'ions de Jean-Pierre Schermann et Michel Vedel
La spectrométrie de masse en tandem, qui consiste à isoler un ion, le fragmenter et analyser les fragments, est systématiquement utilisée dans de nombreuses applications.
Exemple : en protéomique, elle permet une identification des protéines par comparaison avec les bases de données existantes, un séquençage de novo de protéines inconnues ou la caractérisation d'éventuelles modifications posttraductionnelles...
La spectrométrie de masse en tandem est également utilisée pour l'identification et la quantification de petites molécules. Les techniques les plus usuelles pour fragmenter un ion sont les collisions avec un atome ou une molécule neutre, un ion ou un électron. La dissociation activée par collisions (collision activated dissociation : CAD) sur un gaz neutre (hélium ou argon) induit un chauffage vibrationnel global de la molécule qui fragmente dès que les voies de dissociation les plus basses en énergie sont ouvertes. La capture électronique (electron capture dissociation : ECD) et les réactions ions-ions (electron transfer dissociation : ETD) ont émergé comme des techniques de fragmentation alternatives. Elles font intervenir une excitation électronique de l'ion et conduisent à des voies de fragmentation différentes et complémentaires de celles observées par CAD.
La lumière peut également être utilisée pour exciter et fragmenter un ion. L'absorption de la lumière par l'ion va dépendre de la longueur d'onde choisie (figure ). L'énergie des photons infrarouges correspond aux excitations vibrationnelles des ions et permet un chauffage de ces ions conduisant à des schémas...
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