Bibliographie & annexes
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RÉSUMÉ
Cet article est consacré aux analyses microbiologiques appliquées aux antibiotiques. Il débute par les principes et modes opératoires des méthodes utilisées (turbidimétrie ou diffusion) permettant le titrage d’un antibiotique. Sont ensuite décrites les méthodes officielles adaptées à la détection des traces d’antibiotiques dans les aliments, successivement la viande, les produits d’aquaculture puis le lait. Pour terminer, la détermination de l’activité antimicrobienne des antiseptiques et désinfectants est longuement traitée, les normes du Comité européen de normalisation sont énoncées.
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Lire l’articleAuteur(s)
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Pascale BOUTTIER-BÉCASSE : Faculté de Pharmacie Paris V
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Pascale NABET : Responsable du contrôle qualité, centre de production API pharmaceutiques
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Corinne DANAN : Agence française de sécurité sanitaire des aliments AFSSA
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Jean-Pierre MORÉTAIN : Agence française de sécurité sanitaire des aliments AFSSA
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Jacques-Christian DARBORD : Faculté de Pharmacie Paris V
INTRODUCTION
Le titrage microbiologique d’un antibiotique peut se faire par diffusion ou par turbidimétrie. Les deux principes et les modes opératoires sont décrits dans le paragraphe 1 . Il existe, en France, des méthodes officielles de détection de ces antibiotiques dans l’alimentation. Ces méthodes sont décrites dans le paragraphe 2 . Les antiseptiques et les désinfectants sont des produits qui doivent posséder une action létale vis-à-vis des microorganismes. Cette activité antimicrobienne fait l’objet du paragraphe 3 .
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Méthodes microbiologiques pour la détection de traces d’antibiotiques dans les aliments
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1. Titrages microbiologiques des antibiotiques
par Pascale NABET
La méthode la plus ancienne pour déterminer le titre d’un antibiotique est le titrage microbiologique. Le principe en est simple : il suffit de mesurer l’inhibition par l’antibiotique à doser de la croissance d’un micro-organisme sensible. Le titrage peut se faire avec un micro-organisme cultivé en milieu solide (il s’agit des titrages par diffusion) ou avec un micro-organisme cultivé en milieu liquide (il s’agit des titrages par turbidimétrie).
Le choix de la méthode de titrage dépend de la concentration d’antibiotique à mesurer, du milieu dans lequel se trouve l’antibiotique, du nombre d’analyses à effectuer et de la capacité d’automatisation du laboratoire.
1.1 Principe des méthodes
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Dosages par diffusion
La croissance microbienne a lieu en milieu solide. Le milieu gélosé en surfusion est ensemencé avec le micro-organisme test puis versé en couche uniforme dans une boîte de diffusion (généralement grande boîte de Petri de forme rectangulaire). Les solutions antibiotiques de référence et à tester sont déposées dans des cupules découpées dans la gélose ou dans des cylindres inox disposés sur la gélose ou encore sur des disques pour antibiogramme. Avant incubation, une prédiffusion à température ambiante est réalisée puis les boîtes sont mises à incuber pendant 18 h à 32 oC environ. Après incubation, les zones d’inhibition de la croissance microbienne sont mesurées. Elles sont proportionnelles aux concentrations mises en œuvre (figure 1) . Le titre de l’antibiotique à tester est calculé à l’aide de méthodes statistiques appropriées .
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Dosages par turbidimétrie
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Titrages microbiologiques des antibiotiques
BIBLIOGRAPHIE
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(1) - * - Pharmacopée Européenne 2.7.2 Titrage microbiologique des antibiotiques.
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(2) - * - USP <81> Antibiotics-Microbial assays.
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(3) - * - Pharmacopée Européenne, 5.3 Analyse statistique des résultats des dosages et essais biologiques.
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(4) - ANON - Detection and confirmation of inhibitors in milk and milk products - . Bulletin of the International Dairy Federation, 258, 2-81 (1991).
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(5) - ANON - Détection des antibiotiques - Des méthodes adaptées à chaque étape de la filière - . Revue Laitière Française, 579, 21 (1998).
-
(6) - BOGAERTS (R.), WOLF (F.) - A standardized method for the detection of residues of antimicrobial substances in fresh meat - . Die Fleischwirtschat : 60, 667-675 (1980).
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