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RÉSUMÉ
Une nouvelle stratégie pour surveiller la santé des abeilles permet de déterminer rapidement l’implication de produits phytosanitaires dans les cas de mortalité massive aigüe d’abeilles. Cette approche analytique permet d’élargir à de nouvelles molécules la recherche de pesticides qui ciblent le plus souvent les insecticides pyréthrinoïdes ou néonicotinamides. Cet article décrit les différentes étapes d’extraction et les analyses chromatographiques pour le dépistage et la quantification des pesticides. Le cas d’une intoxication d’abeilles vient illustrer l’efficacité de cette stratégie.
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New strategy for monitoring bee health allows for rapid determination of crop protection product involvement in acute bee mortality. This analytical approach allows to extend to new molecules, the search for pesticides that most often target pyrethroid or neonicotinamide insecticides. This article describes the different steps of extraction and chromatographic analysis for the detection and quantification of pesticides. The case of a bee poisoning illustrates the efficiency of this strategy.
Auteur(s)
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Valérie BOUCHART : Responsable d’unité Santé publique - LABÉO, Saint Contest, France - UMR INSERM 1086 Anticipe, université de Caen-Normandie, centre François Baclesse, Caen, France
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Margot BEGUE : Assistante de recherche - LABÉO, Saint Contest, France
INTRODUCTION
Les abeilles jouent un rôle essentiel dans l’équilibre de nos écosystèmes. La mortalité des abeilles est un phénomène naturel dans les ruchers puisque chaque hiver 5 à 10 % des colonies décèdent. Cependant depuis le milieu des années 80, des cas de surmortalité des colonies d’abeilles sont observés au niveau mondial. Depuis 1998, le phénomène est appelé « syndrome d'effondrement des colonies d’abeilles » (en anglais : « Colony Collapse Disorder » : CCD). Il s’agit d’un phénomène complexe aux origines multiples : causes biologiques, exposition aux produits chimiques employés dans l’environnement, alimentation, pratiques apicoles… La diversité de ces causes, pouvant intervenir de manière isolée ou en association, est susceptible de participer à l’affaiblissement des colonies voire de provoquer une mortalité massive aigüe d’abeilles (MMAA). Une colonie d’abeilles est considérée victime de MMAA lorsque, brutalement et sur une période inférieure à 15 jours, des abeilles adultes sont retrouvées mortes ou moribondes sous forme d'un tapis devant ou dans la ruche (volume d’abeilles touchées supérieur à un litre), et/ou lorsque la colonie est victime de dépopulation (hors essaimage), c'est-à-dire qu'il y a disparition d’une grande partie des abeilles adultes avec présence dans la ruche d’une population très réduite d’abeilles avec présence de couvain, de réserves de miel et de pollen en quantité.
En Normandie, les directions départementales de protection des populations (DDPP) centralisent les déclarations et observations des MMAA des apiculteurs. Le vétérinaire doit alors orienter les investigations, s’il s’agit d’une suspicion de maladies classées dangers sanitaires de premières catégories comme : la loque américaine, la nosémose, le petit coléoptère de la ruche (Aethina tumida) et l’acarien parasite Tropilaelaps clareae, ou s’il s’agit d’une suspicion de MMAA liée à une intoxication par des agents chimiques comme les produits phytopharmaceutiques, les biocides ou les médicaments vétérinaires. Les cas de dépérissement ou d’affaiblissement ne sont actuellement pas pris en compte dans ce dispositif, du fait de leur caractère non aigu. Parmi ces produits potentiellement toxiques, les recherches réalisées s’intéressent essentiellement aux pesticides comme les composés organophosphorés, les produits organochlorés, les pyréthrinoïdes et les néonicotinamides. Il est cependant intéressant de suivre d’autres familles d’insecticides ou d’autres types de molécules pesticides, comme les herbicides, fongicides, auxquelles les abeilles peuvent être potentiellement exposées dans leur environnement. Afin de répondre à ces besoins, l’objectif de cet article est donc de déterminer rapidement, après la collecte des échantillons d’abeilles mortes, la présence de produits chimiques dans un spectre suffisamment large, d’aider les autorités à prendre les mesures sanitaires adaptées et de définir les suites à donner, en enquêtant sur l’origine de la contamination. Pour cela, plusieurs analyses sont mises en œuvre au laboratoire.
cet article est issu de la revue « Annales des falsifications, de l'expertise chimique et toxicologique » éditée par la SECF (Société des experts chimistes de France).
MOTS-CLÉS
KEYWORDS
Bee | pesticide | poisoning | LC-Q-Tof | LC-MS/MS
DOI (Digital Object Identifier)
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1. Méthodes d’analyse chromatographiques
Afin d’être le plus exhaustif possible, une stratégie d’analyse a été développée et vise à dépister la présence éventuelle de pesticides par une analyse chromatographique non ciblée en chromatographie liquide couplée à un détecteur de masse à temps de vol (LC-Q-Tof : Liquid Chromatography Quadrupole Time-of-flight) et une confirmation et quantification par une analyse ciblée en chromatographie liquide avec spectromètre de masse en tandem (LC-MS/MS : Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry) pour une liste de 208 molécules potentiellement présentes dans l’environnement. Dans ce cas, le recours à la chromatographie liquide oriente les recherches vers les molécules polaires. En parallèle, une démarche comparable est réalisée pour les molécules apolaires avec des analyses en GC/MS avec confirmation en GC/MS/MS afin d’élargir ces recherches à un spectre large d’agents chimiques.
L’objectif est de disposer d’une méthode permettant d’extraire et de quantifier une grande variété de résidus de pesticides et certains métabolites dans des matrices complexes telles que les abeilles, qui est une matrice riche en matière grasse et en pigment. Dans le cas de l’analyse de résidus de pesticides, la qualité et la maîtrise des phases d’extraction et de purification sont essentielles pour éviter les interférences et l’encrassement des chaînes analytiques.
1.1 Préparation des échantillons
Lors de la survenue d’une MMAA , les échantillons d’abeilles mortes collectés au niveau des ruches sont congelés et transmis au laboratoire pour analyse. Il faut un prélèvement d’au minimum une centaine d’abeilles (figure 1), soit environ 10 g, pour pouvoir les broyer finement et obtenir un échantillon bien représentatif.
Le protocole développé est basé sur la méthode normalisée « QuEChERS » soit Qu ick, E asy, Ch eap, E fficient, R ugged and S afe (rapide, facile, abordable, efficace, robuste et sécuritaire) ...
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Méthodes d’analyse chromatographiques
BIBLIOGRAPHIE
-
(1) - * - Instruction technique DGAL/SASPP/2018-444 du 12/06/2018 – Surveillance des mortalités massives aiguës d'abeilles adultes avec hypothèse d'intoxication par des produits et pratiques phytopharmaceutiques, biocides et médicamenteuses.
-
(2) - AFNOR - * - . – Norme française NF EN 15662 : Aliments d'origine végétale – Multiméthode de détermination des résidus de pesticides par analyse CG et CL après extraction/partition avec de l'acétonitrile et purification par SPE dispersive – méthode modulaire QuEChERS (mai 2018).
-
(3) - AFNOR - * - . – Norme française NF V03-110 : Analyse des produits agricoles et alimentaires – Protocole de caractérisation en vue de la validation d'une méthode d'analyse quantitative par construction du profil d'exactitude (mai 2010).
-
(4) - INRS - Base de données INRS fiches toxicologiques – Fipronil – Fiche toxicologique n° 286. - Édition 2012.
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(5) - ANSES - * - ....
DANS NOS BASES DOCUMENTAIRES
NORMES
-
Analyse des produits agricoles alimentaires – Protocole de caractérisation en vue de la validation d'une méthode d'analyse quantitative par construction du profil d'exactitude. - NF V03-110 - 2010
-
Aliments d'origine végétale – Multiméthode de détermination des résidus de pesticides par analyse CG et CL après extraction/partition avec de l'acétonitrile et purification par SPE dispersive – méthode modulaire QuEChERS. - NF EN 15662 - 2018
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