Article de référence | Réf : BIO7115 v1

Principe de biocapteurs
Application des biocapteurs pour la détection des pathogènes

Auteur(s) : Jasmina VIDIC

Relu et validé le 29 janv. 2021

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RÉSUMÉ

Le développement de nouveaux outils de diagnostic et de pronostic des maladies infectieuses basés sur la reconnaissance d'un biomarqueur de pathogènes dans des échantillons biologiques est une discipline émergente. Actuellement, le diagnostic repose principalement sur des observations cliniques, cultures microbiologiques et divers tests moléculaires qui prennent du temps et souvent ne sont pas suffisamment sensibles. Cet article présente de nouvelles stratégies de détection de pathogènes qui ont permis l'élaboration de dispositifs diagnostiques rapides, sensibles et commercialisés qui montrent une capacité accrue en termes de facilité, de coût, de sensibilité et de spécificité.

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ABSTRACT

Application of biosensors for pathogen detection

The development of new diagnostic and prognostic tools for infectious diseases based on the recognition of a pathogen biomarker in biological samples is an emerging research area. Current diagnostics based mainly on clinical observations, microbiological cultures, and various molecular test methods, are time-consuming and often not sensitive enough. This article presents new pathogen detection strategies that support the design of alternative, rapid, sensitive and commercially available diagnostic devices with improved ease of use, price, sensitivity and specificity.

Auteur(s)

  • Jasmina VIDIC : Ingénieur de recherche - Virologie et immunologie moléculaires, UR892, INRA, Jouy-en-Josas, France

INTRODUCTION

De nouvelles méthodes de détection précoce des pathogènes d’origine virale ou bactérienne pourraient sauver des millions de vies et avoir un impact socio-économique important. En effet, la détection d’agents pathogènes est aujourd’hui une préoccupation essentielle aussi bien dans le domaine de la médecine que dans celui de l’environnement ou de l’agroalimentaire. Les techniques d’analyse conventionnelles sont souvent lentes, très coûteuses, lourdes à mettre en œuvre et nécessitent du personnel et des infrastructures spécialisées. En effet, les phases de préparation des échantillons (séparation cellulaire, extraction de l’ADN, marquage, etc.) et d’exploitation des résultats augmentent significativement la durée totale d’analyse. Il existe donc un réel besoin de développer de nouveaux systèmes de détection qui pourront être utilisés en dehors des laboratoires spécialisés. Ces systèmes devraient avoir une haute sensibilité et sélectivité en permettant de détecter efficacement le pathogène d’intérêt dans des mélanges contenant un grand nombre de molécules différentes (biologiques ou non biologiques) et/ou d’autres micro-organismes (non pathogènes).

L’émergence de maladies infectieuses est une menace très importante en santé publique. Bien que la majorité des infections virales ou bactériennes présentent des signaux cliniques très évocateurs et régressent d’elles-mêmes, dans certaines situations le diagnostic précis de l’agent pathogène responsable des signaux observés est nécessaire. Un dépistage rapide en dehors des infrastructures spécialisées ou dans les services d’urgences hospitaliers permettra d’optimiser la prise en charge des malades et d’augmenter les chances de survie des patients. En plus de diminuer les coûts liés à la thérapie, cela permettra de juger de l’efficacité des traitements antiviraux et/ou limitera les échecs thérapeutiques dus à la résistance bactérienne aux antibiotiques.

Les applications des biocapteurs pour la détection des micro-organismes dans les aliments résultent d’une exigence de plus en plus importante dans l’industrie agroalimentaire sur la qualité des aliments et le suivi des différentes étapes de production par des techniques analytiques fiables et peu coûteuses. Une contamination des aliments par des bactéries pathogènes peut provoquer des maladies, des décès et d’énormes dégâts économiques. On estime que les maladies infectieuses d’origine alimentaire, comme celles causées par les bactéries Listeria sp., Escherichia coli ou Salmonella sp., comptent pour 40 % du total des 50 millions de décès recensés chaque année dans le monde. L’utilisation de biocapteurs à forte affinité vis-à-vis des agents pathogènes, capables de les détecter sélectivement et spécifiquement en quelques minutes, conduira à une sécurité alimentaire accrue et réduira les risques sanitaires. Le secteur de la protection et de la surveillance de l’environnement utilise aussi des biocapteurs. Idéalement, le biocapteur pour les mesures sur terrain doit être facile à mettre en œuvre et doit permettre des analyses sans aucun prétraitement de l’échantillon. La tendance est de développer des dispositifs qui peuvent être automatisés et contrôlés à distance. En ce qui concerne la sensibilité analytique, la limite de détection du biocapteur doit permettre de détecter la dose infectieuse, c’est-à-dire la quantité minimale de l’agent pathogène qui peut déclencher l’infection.

Les biocapteurs sont des dispositifs souvent simples et compacts, typiquement constitués d’une partie biosélective qui assure la reconnaissance, et d’une partie transducteur qui transforme des modifications biochimiques induites par la reconnaissance en signal physique mesurable. Les deux parties peuvent être connectées à un système d’exploitation qui permet le traitement des données. Des micro- et nano-biocapteurs appliqués à la détection d’espèces pathogènes sont en cours de développement. La miniaturisation permet de réduire le coût et le temps d’analyse et d’améliorer les performances analytiques des dispositifs. Néanmoins, malgré les efforts de recherche consentis, peu de réalisations commerciales ont été réalisées jusqu’à présent en raison de la difficulté technique qu’implique la fonctionnalisation d’un transducteur par une espèce biologique.

Trois points sont présentés dans cet article :

  • le principe de fonctionnement des biocapteurs ;

  • le développement des biocapteurs pour la détection des pathogènes et ;

  • quelques réalisations de biocapteurs commercialisés pour la détection de virus et de bactéries.

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KEYWORDS

Signal transduction   |   Biomarkers   |   Bioreceptors   |   diagnostic   |   surveillance

DOI (Digital Object Identifier)

https://doi.org/10.51257/a-v1-bio7115


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1. Principe de biocapteurs

Dans le cas d’un biocapteur pour la détection des pathogènes, les entités biologiques (enzyme, anticorps, antigène, ADN, ARN, organite cellulaire, cellule, tissu, etc.) qui reconnaissent spécifiquement la cible (virus, bactérie) sont immobilisés sur le support solide du biocapteur (figure 1). Grâce à la simplicité de cette construction, le biocapteur peut identifier les pathogènes en un temps très court.

Le biocapteur le plus ancien est le biocapteur électrochimique qui permet de mesurer la concentration en glucose dans le sang. Le dispositif développé par Clark en 1962  a été révolutionnaire car c’était la première fois qu’une biomolécule a servi d’élément de reconnaissance d’un capteur. En effet, Clark a eu l’idée de transformer la réaction enzymatique catalysée par la glucose-oxydase en signal électrique afin de quantifier la concentration de son substrat, le glucose. Depuis la publication de Clark, une centaine d’autres enzymes ont été utilisées pour les biocapteurs enzymatiques. Le domaine des biocapteurs s’est ensuite élargi avec d’autres protéines solubles ou membranaires, des oligomères, des lipides, etc., ainsi que de nouvelles molécules synthétiques comme les aptamères. Les nanotechnologies ont impacté ce développement en synergie avec les recherches multidisciplinaires permettant des stratégies émergentes, qu’il s’agisse de nouveaux matériaux ou de systèmes de reconnaissance au « point d’intervention » (point-of-care ). Ces tests, réalisés et interprétés sur place, sont encore plus rapides et plus robustes et améliorent la qualité et la facilité du diagnostic. En effet, les biocapteurs permettent de raccourcir le laps de temps entre le prélèvement de l’échantillon et l’obtention de résultats, mais leur manque de sensibilité, lorsqu’on s’adresse à des applications du domaine de la détection des pathogènes, s’est imposé comme un inconvénient majeur. Les nanotechnologies...

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BIBLIOGRAPHIE

  • (1) - CLARK (L.C.) Jr, LYONS (C.) -   Electrode systems for continuous monitoring in cardiovascular surgery.  -  Ann. N. Y. Acad. Sci., 102, p. 29-45 (1962).

  • (2) - SCOGNAMIGLIO (V.) -   Nanotechnology in glucose monitoring : Advances and challenges in the last 10 years.  -  Biosens. Bioelectron., 47, p. 12-25 (2013).

  • (3) - OZAWA (T.), KINOSHITA (K.), KADOWAKI (S.), TAJIRI (K.), KONDO (S.), HONDA (R.), IKEMOTO (M.), PIAO (L.), MORISATO (A.), FUKUROTANI (K.), KISHI (H.), MURAGUCHI (A.) -   MAC-CCD system : a novel lymphocyte microwell-array chip system equipped with CCD scanner to generate human monoclonal antibodies against influenza virus.  -  Lab. Chip., 9, p. 158-163 (2009).

  • (4) - MAHALANABIS (M.), AL-MUAYAD (H.), KULINSKI (D.), ALTMAN (D.), KLAPPERICH (C.M.) -   Cell lysis and DNA extraction of gram-positive and gram-negative bacteria from whole blood in a disposable microfluidic chip.  -  Lab. Chip., 9, p. 2811-2817 (2009).

  • (5) - SOARES (R.R.G.), NOVO (P.), AZEVEDO (A.M.), FERNANDES (P.), AIRES-BARROS (M.R.), CHUA (V.), CONDE (J.P.) -   On-chip sample preparation...

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