1 - MONOSACCHARIDES

• 1.1 - Formules, isoméries et structures des monosaccharides
• 1.2 - Propriétés physico-chimiques des monosaccharides
  Figure 2 - Formules linéaires des oses

2 - GLYCOSIDES

• 2.1 - Holosides
• 2.2 - Hétérosides. L’exemple des glycoconjugués
  Figure 4 - Structure de l’amylopectine Figure 5 - Structure de la molécule élémentaire de cellulose. L’association par des liaisons ponts hydrogène d’un nombre élevé de cette molécule conduit à la fibre de cellulose elle-même Figure 7 - Exemple de noyau (inner-core) de glycoprotéines. Le noyau A est présent dans les glycannes dits de type mucine, le noyau B dans les glycannes dits de type protéoglycanne et le noyau C dans toutes les N-glycosylprotéines Figure 8 - Exemples de structures de glycannes de type mucine. A : mucine salivaire ; B : glycanne de la glycoprotéine « antigel » du sang des poissons des mers froides ; C : glycanne de la glycophorine ; D : glycanne de groupe sanguin O Figure 9 - Exemple de structure d’un glycanne de type protéo-glycanne : l’acide chondroitine sulfurique A des cartilages. GlcUA : acide glucuronique Figure 10 - Exemple de structure d’un N-glycanne de type oligomannosidique présent dans de nombreuses glycoprotéines comme la thyroglobuline de la glande thyroïde, l’hémocyanine du scorpion, les levures et la lactotransferrine du lait de vache Figure 11 - Structure de base des glycannes de type N-acétyllactosaminique. L’association des antennes A et B, A, B et C, A, B et D et A, B, C et D conduisent aux structures dites bi-antennées, tri-antennées, tri’-antennées et tétra-antennées, respectivement Figure 12 - Exemples de glycannes bi-antennés. Sans GlcNAc(β1-4) ni Fuc(α1-6) : glycanne de la sérotransferrine humaine ; sans GlcNAc(β1-4) et avec Fuc(α1-6) : glycanne de la lactotransferrine du lait de femme ; avec GlcNAc(β1-4) et Fuc(α1-6) : glycanne d’immunoglobulines IgG humaines Figure 13 - Glycanne de type hybride d’une hormone glycoprotéique hypophysaire Tableau 1 - Sigles désignant les monosaccharides les plus courants Nomenclature [...]

3 - PROCÉDÉS D’ISOLEMENT DES GLUCIDES LIBRES ET CONJUGUÉS

• 3.1 - Isolement des glycoprotéines et des glycopeptides
  Figure 14 - Structure générale d’une céramide (R : acide gras à longue chaîne) Figure 15 - Structure de glycolipides. A : antigène de groupe tissulaire PK et marqueur de cancérisation ; B : antigènes de groupes sanguins : groupe O : R = H, groupe B : R = Gal(α1-3) ; groupe A : R = GalNac(α1-3). Cer : céramide Tableau 2 - Préparation des glycopeptides
• 3.2 - Procédés de libération des glycannes
  Figure 17 - Motifs glucidiques pour lesquels l’affinité des lectines SNA, MAA, RCA, Con A, LCA, DBA, UEA I est maximale. A : cas d’un glycanne bi-antenné. B : les oligosaccharides reconnus par DBA et UEA I sont les épitopes glucidiques des groupes sanguins A ou B et O, respectivement Figure 18 - Schéma de fractionnement séquentiel de glycopeptides par chromatographie d’affinité sur colonnes montées en tandem de ConA et de LCA immobilisées. FNR : fraction non-retenue ; FFR : fraction faiblement retenue ; FR : fraction retenue Tableau 3 - Préparation de colonnes de lectines immobilisées Tableau 4 - Chromatographie d’affinité sur Con A immobilisée d’un mélange de [...] Tableau 5 - Exemple d’hydrazinolyse d’une N-glycosylprotéine Tableau 6 - Clivage réducteur des liaisons O-glycosidiques impliquant la sérine [...] Tableau 7 - Clivage réducteur des liaisons N-glycosidiques Tableau 8 - Protocole d’action des peptide-N-glycanases sur les glycoprotéines
• 3.3 - Procédés d’isolement des oligosaccharides libres ou libérés
  Figure 19 - Mécanisme de la pyridylamination des oligosaccharides Tableau 9 - Protocole d’action de l’endo-N-acétyl-β -D-glucosaminidase H Tableau 10 - Chromatographie de type HPLC d’oligosaccharides neutres sur colonne [...] Tableau 11 - Chromatographie de type HPLC préparative d’échange d’ions de sialoglycannes Tableau 12 - Chromatographie préparative de type HPLC en phase reverse [...] Tableau 13 - Chromatographie de glycannes neutres par Dionex-HPAE Tableau 14 - Pyridylamination des oligosaccharides

4 - MÉTHODES DE DOSAGE DES GLUCIDES

• 4.1 - Détermination de la composition centésimale en monosaccharides par méthodes colorimétriques
  Figure 20 - Mécanisme de la formation de furfural dans le cas des pentoses (R = H), d’hydroxyméthylfurfural dans le cas des hexoses (R = CH2OH) et d’acide 5-formylfuroïque dans le cas des acides uroniques (R = COOH) Figure 21 - Mécanisme de la réaction d’Elson-Morgan Tableau 15 - Dosage des oses neutres totaux par la méthode à l’orcinol sulfurique Tableau 16 - Dosage des oses neutres par la méthode au phénol sulfurique Tableau 17 - Dosage des acides uroniques par la méthode au carbazol sulfurique Tableau 18 - Dosage des osamines par la méthode d’Elson et Morgan Tableau 19 - Dosage des acides sialiques conjugués totaux par la méthode à la [...] Tableau 20 - Dosage des acides sialiques libres par la méthode de Warren
• 4.2 - Détermination de la composition molaire en monosaccharides
  Figure 22 - Méthanolyse des oligosaccharides et triméthylsilylation des méthylglycosides

5 - DÉTERMINATION DE LA STRUCTURE PRIMAIRE

• 5.1 - Procédés chimiques
  Tableau 22 - Conditions d’hydrolyse quantitative des liaisons glycosidiques des [...] Tableau 23 - Perméthylation des oligo- et polysaccharides par la méthode à la [...] Tableau 24 - Méthanolyse des oligosaccharide-alditols perméthylés
• 5.2 - Procédés physiques
  Figure 23 - Spectre de FAB-MS d’un hexasaccharide alditol fucosylé isolé du lait de femme Figure 24 - Analyse par MALDI-TF-MS de glycopeptides désialylés obtenus par protéolyse d’une glycoprotéine contenant 11 glycannes différents : ▪ N-acétylglucosamine, • : mannose ; ▾ : galactose ; ⋆ : fucose. T3 : tripeptide Tableau 25 - Procédé général d’hydrolyse récurrente des oligo- et polysaccharides [...]
• 5.3 - Procédés enzymatiques
  Figure 25 - Spectre RMN des protons d’un sialodécasaccharide montrant qu’il est possible de distinguer et de localiser sur les antennes les résidus d’acide sialique liés en α-2,3 ou en α-2,6. Les chiffres se rapportent à la numérotation des monosaccharides constituant le saccharide. HOD : eau deutériée N3, N6 : résidus d’acide sialique conjugués en α-2,3 et en α-2,6, respectivement sur les résidus terminaux de β-galactose