Bibliographie & annexes
Présentation
English
Auteur(s)
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Jean MONTREUIL : Professeur émérite ; docteur ès sciences
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André VERBERT : Professeur ; docteur ès sciences - Laboratoire de chimie biologique - Unité mixte de recherche n o 111 CNRS , Université des sciences et technologies de Lille
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Lire l’articleINTRODUCTION
Les glucides, encore appelés sucres ou hydrates de carbone , représentent, avec les protéines, les lipides et les acides nucléiques, l’une des quatre grandes classes de constituants de la matière vivante. De tout temps, ils ont fait l’objet de recherches actives, principalement en raison de leur importance économique et, à cet égard, l’industrie des hauts glycopolymères comme l’amidon, la cellulose, les gommes et les pectines s’est développée dès le XIX e siècle. Mais, à cet intérêt économique, s’est rapidement ajouté un intérêt biologique dû, par exemple, au fait que le glucose et le glycogène sont, pour l’Homme, source d’énergie pour le premier et réserve d’énergie pour le second. Très tôt, une glycopathologie est née liée aux troubles de la régulation du métabolisme glucidique, comme dans le cas du diabète. Enfin, et plus récemment, la découverte que certains glucides complexes − ceux qui, en particulier, entrent dans la constitution des membranes cellulaires − sont porteurs de messages et jouent un rôle essentiel dans la vie sociale des cellules, a introduit les glucides dans le domaine de la biologie moléculaire. Ainsi est né au fil des ans le terme de glycotechnologie qui concerne l’ensemble des techniques susceptibles de produire des glucides d’intérêt économique dans les domaines de la santé et de l’agroalimentaire, en particulier.
Les glucides sont classés en glucides simples : les monosaccharides , et en produits de condensation de ces derniers : les glycosides .
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Détermination de la structure primaire
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4. Méthodes de dosage des glucides
Le premier problème qui se pose dans l’étude d’un oligo- ou d’un polysaccharide libre ou conjugué concerne sa composition en monosaccharides. Il soulève deux questions :
1) Quelle est la composition centésimale du composé en monosaccharides neutres, en osamines, en acides uroniques et en acides sialiques ?
2) Quelle est sa composition molaire en monosaccharides répartis dans les quatre familles précédentes ?
4.1 Détermination de la composition centésimale en monosaccharides par méthodes colorimétriques
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Règles générales
1. Température et temps de chauffage ont une grande importance dans le développement des colorations et devront être très exactement fixés.
2. Tous les tubes à essais utilisés devront posséder le même diamètre et être rigoureusement propres.
3. Avant d’être placés au bain-marie, les milieux réactionnels seront soigneusement homogénéisés par une agitation prolongée à l’aide de tiges de verre aplaties à une extrémité.
4. Les réactifs se conservent généralement pendant plusieurs semaines à 4 C.
5. Les réactions sont sensibles à la présence de métaux, de sels de fer en particulier. En conséquence, les réactifs seront conservés dans des flacons en verre Pyrex blanc.
6. Les colorations n’étant pas reproductibles d’une expérience à l’autre, on ne peut se référer à des courbes étalons et il est nécessaire d’introduire dans chaque série de dosages des témoins internes constitués par des solutions titrées de monosaccharides préalablement déshydratés sous vide en présence d’anhydride phosphorique ou de soude.
7. Les solutions titrées sont préparées par dilution de solutions mères conservées à − 20 C après avoir été additionnées de quelques gouttes d’acide chlorhydrique pour stabiliser les sucres et de chloroforme pour inhiber le développement de micro-organismes. Les solutions titrées ne sont conservées que 2 à 3 semaines.
8. Les absorbances données, à quantités égales, par les monosaccharides d’une même famille varient d’un sucre à l’autre. Il est donc nécessaire, après avoir pris connaissance des rapports molaires...
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BIBLIOGRAPHIE
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(1) - CHAPLIN (M.F.), KENNEDY (J.F.) - Carbohydrate Analysis. A practical approach - , IRL Press, Oxford, 1994.
-
(2) - DUMITRIU (S.) - Polysaccharides in Medicinal Applications - , Marcel Dekker, New York, 1996.
-
(3) - HOUNSELL (E.) - Glycoprotein analysis in Biomedicine. - In J. Walker (ed), Methods in molecular biology, Humana Press, Totowa (N.J.), 1993.
-
(4) - MONTREUIL (J.), VLIEGENTHART (J.F.G.), SCHACHTER (H.) - Glycoproteins - , Comprehensive Biochemistry, vol. 29a (1995) and vol. 29b (1997), Elsevier, Amsterdam.
-
(5) - VERBERT (A.) - Methods on Glycoconjugates. - A Laboratory manual, Harwood Academic, Chur (CH), 1995.
-
(6) - WIEGANDT (H.) - Glycolipids. - In A. Neuberger and L.L.M. van Deenen, Comprehensive Biochemistry, vol. 10, pp. 1-188, Elsevier, Amsterdam, 1985.
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