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Article

1 - ASPECTS PRATIQUES DE L’IMAGERIE DE L’ADN PAR AFM

2 - SURFACES ET IMAGERIE PAR AFM DES ACIDES NUCLÉIQUES

3 - APPLICATIONS

4 - CONCLUSION

Article de référence | Réf : RE115 v1

Aspects pratiques de l’imagerie de l’ADN par AFM
Techniques d'observation des acides nucléiques et des complexes nucléoprotéiques par AFM

Auteur(s) : Loïc HAMON, Patrick A. curmi, David PASTRE

Relu et validé le 01 janv. 2023

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RÉSUMÉ

L'expérimentateur qui souhaite observer des biomolécules peut choisir parmi plusieurs systèmes d’imagerie, dont la microscopie à force atomique (AFM). L'obtention d'une image par AFM se fait par le balayage d'une surface par un microlevier terminé par une pointe de dimension nanométrique. Les déplacements du microlevier sont commandés par les déformations d'une céramique piézo-électrique sous l'effet de la tension qui lui est appliquée. Ainsi interagissent la surface du substrat, l’ADN et éventuellement des protéines. Après un rappel des principes de base de fonctionnement de l’AFM, cet article permet d’établir théoriquement et expérimentalement les conditions pour l’obtention d’informations pertinentes concernant l'interaction propre entre les biomolécules. Les améliorations de cette technique reposent essentiellement sur l’augmentation de la résolution latérale et de la vitesse de balayage.

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ABSTRACT

Observation techniques of nucleic acids and nucleoprotein complexes by AFM

The experimenter who whishes to observe biomolecules can choose between several systems of imagery, including the atomic force microscopy (AFM). Obtaining an image via AFM is achieved by scanning a surface with a microlever ending in a nanometer-sized point. The movements of the microlever are controlled by the deformations of a piezo-electric ceramic under the effects of the applied voltage. Thus the surface of the substrate, the DNA and possibly proteins interact. After having recalled the basic operating principles of the AFM, this article allows for the theoretical and experimental establishment of the conditions for obtaining accurate information concerning the specific interaction between the biomolecules. This technique is essentially improved by increasing the lateral resolution and the scanning speed.

Auteur(s)

INTRODUCTION

Dans un système d'imagerie biomoléculaire comme la microscopie à force atomique (AFM) où plusieurs partenaires interagissent, ici la surface du substrat, l'ADN et éventuellement des protéines, il est primordial d'établir théoriquement et expérimentalement les conditions permettant d'obtenir des informations biologiquement pertinentes concernant l'interaction propre entre les biomolécules.

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DOI (Digital Object Identifier)

https://doi.org/10.51257/a-v1-re115


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1. Aspects pratiques de l’imagerie de l’ADN par AFM

Loïc HAMON est Maître de ­conférence à l’Université d’Evry.

Patrick A. CURMI est Directeur de recherche, INSERM.

David PASTRE est Maître de ­conférence à l’Université d’Evry.

Ils travaillent au Laboratoire structure-activité des biomolécules normales et pathologiques sur la caractérisation des interactions protéine/protéine et ADN/protéines par AFM.

1.1 Principes de fonctionnement de l'imagerie AFM

L'instrumentation et les principes de fonctionnement de l'AFM ont d'ores et déjà été largement détaillés dans cette collection. Néanmoins, pour une meilleure lisibilité de ce dossier, il est nécessaire de rappeler les principes de base de fonctionnement de l'AFM et l'adaptation des différents modes d'imagerie à l'observation de l'ADN et des complexes nucléoprotéiques.

AFM : Atomic Force Microscopy : microscopie à force atomique

ADN : acide désoxyribonucléique

Sur l'AFM Microscopie à force atomique (AFM) [R 1 394] de J.C. Rivoal et de C. Fretigny

L'obtention d'une image par AFM se fait par le balayage d'une surface par un microlevier terminé par une pointe de dimension nanométrique. Les déplacements du microlevier sont commandés par les déformations d'une céramique piézo-électrique sous l'effet de la tension qui lui est appliquée. Les forces d'interaction entre la pointe et la surface sont suivies par un faisceau laser défléchi sur le microlevier vers une photodiode à 4 cadrans qui convertit les déplacements du spot lumineux en signaux électriques. Ceux-ci sont traités par une électronique de contrôle et la répétition de ce processus ligne par ligne sur une zone de balayage aboutit à la construction d'une image tridimensionnelle (figure 1a).

La surface totale balayée peut aller jusqu'à plusieurs milliers de μm2 et dépend de la céramique piézo-électrique utilisée. La résolution...

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BIBLIOGRAPHIE

  • (1) - RIVOAL (J.C.), FRETIGNY (C.) -   Microscopie à Force Atomique.  -  [R 1 394], Mesures – Essais (2005).

  • (2) - HANSMA (H.G.) -   Surface biology of DNA by atomic force microscopy.  -  Annu. Rev. Phys. Chem., 52, p. 71-92 (2001).

  • (3) - LYUBCHENKO (Y.L.) -   DNA structure and dynamics. An atomic force microscopy study.  -  Cell Biochem. Biophys., 41, p 75-98 (2004).

  • (4) - MÜLLER (D.J.), SAPRA (K.T.), SCHEURING (S.), KEDROV (A.), FREDERIX (P.L.), FOTIADIS (D.), ENGEL (A.) -   Single-molecule studies of membrane proteins. Current Opinion in Structural Biology.  -  16/4, p. 489-495 (2006).

  • (5) - MILHIET (P.E.), GIOCONDI (M.C.), LE GRIMELLEC (C.) -   Cholesterol is not crucial for the existence of microdomains in kidney brush-border membrane models.  -  J. Biol. Chem., 277, p. 875-878 (2002).

  • (6) - PASHLEY (R.M.) -   Hydration...

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